36. Bradford assay였츄

오늘 분량 짧습니다. 

1. 뭐 하는 실험인가요? 

단백질 농도 측정하는 실험인데요? 

이게 Bradford assay용 시약입니다. 왼쪽은 아무것도 안 한 상태(대충 새삥). 오른쪽이 단백질 용액과 혼합한 상태입니다. Bradford assay 시약에는 Coomasie blue G-250이라는 염료가 들어있는데, 이 염료가 단백질과 결합하게 되면 파란색이 됩니다. 결합하는 자세한 과정은 생략합니다. (대충 더 이상의 자세한 설명은 생략한다 짤)

그럼 진짜 저것만 있으면 농도 달 수 있어요? 사실... BSA도 필요한데요... (실화)

2. Staandard curve

BSA는 Bovine serum albumin이라는 단백질입니다. 어지간한 시약 벤더들은 다 BSA 취급합니다. (예: Sigma aldrich) 시약들은 일단 개비싼걸로 유명하지만, BSA는 그래도 단백질 중에서는 싼 축입니다. 많이 쓰는거라... 아니 그럼 저 보기만 해도 으아아스러운 저 과정이 왜 필요한가... 

보통 세포나 조직에서 뽑은 단백질은 buffer에 녹아있는 상태입니다. 헬스하시는 분들 드시는 파우더 형태가 아니라요. 그럼 저거 말리고 농도 달면? 저울이 못 달아요... 애초에 뽑은 게 1ml tube에 들어가 있는 상태라니까요. pellet 만들어도 그건 무리데스. 저울: 아니 이건 좀 그리고 말리느라 시간 엄청 날려먹습니다. 그래서 standard curve가 필요합니다. 

3. standard curve 그리는 과정 

위에서 BSA를 쓴다고 했는데, BSA를 특정 농도(랩바랩이지만 보통 ug/ul이 되게 제조합니다)로 만든 다음, Bradford assay를 진행하면 OD595 값이 나오게 됩니다. 그러면 그 나온 값을 바탕으로 선형 회귀분석을 통해 추세선을 그리고, 일차식(y=ax+b)을 도출하면 끝입니다. 거기에 OD595를 대입하면 미지 시료에 있는 단백질의 농도를 알 수 있습니다. 

OD595는 595nm의 파장을 갖는 빛의 흡광도를 측정한다는 얘기입니다. 세균의 경우 보통은 OD600으로 답니다.